Фармакопейные анализы
История официального применения ЛАЛ-теста как средства контроля готовых лекарственных форм в нашей стране началась с принятия в 1997 году Временной Фармакопейной статьи «Определение содержания бактериальных эндотоксинов (ЛАЛ-тест)». С тех пор текст статьи редактировался трижды. Изменилось само название статьи. Серьезно перерабатывались тексты разделов, менялись и уточнялись требования. Корректировались ошибки, уточнялись формулировки, конкретизировались правила интерпретации результатов.
В настоящее время в ГФ XIII включена общая фармакопейная статья ОФС 1.2.4.0006.15 «Бактериальные эндотоксины», принятая в 2016 году. Новая редакция статьи допускает проведение анализа уже шестью различными методами. Введение в ОФС фотометрических методов явилось естественным и ожидаемым шагом, который сделал отечественные требования к проведению контрольных анализов практически полностью идентичными требованиям, описанным в Европейской Фармакопее. Другими словами, сегодня можно говорить, что правила проведения ЛАЛ-теста, приведенные в ГФ, гармонизированы с правилами, принятыми основными Фармакопеями.
Методы проведения анализа, включённые в Фармакопею.
В ОФС 1.2.4.0006.15 «Бактериальные эндотоксины» разрешается проведение анализа шестью различными методами, каждый из них может быть использован для проведения контрольных анализов:
Метод А. Качественный гель-тромб тест
Метод В. Количественный гель-тромб тест
Метод С. Турбидиметрический кинетический тест
Метод D. Хромогенный кинетический тест
Метод Е. Хромогенный тест по конечной точке
Метод F. Турбидиметрический тест по конечной точке.
Эти методы базируются на трех разных способах измерения количества переработанного субстрата, которое зависит от активности ферментной системы, которая, в свою очередь, пропорциональна концентрации эндотоксина в реакционной смеси.
- Количество переработанного субстрата можно оценить визуально – по образованию геля – гель-тромб тест
- Можно оценить инструментально по степени помутнения реакционной смеси, предшествующей гелеобразованию – турбидиметрический тест.
- Можно добавить в лизат искусственный хромогенный субстрат, при переработке которого ферментной системой развивается желтое окрашивание – хромогенный метод.
Каждая из этих трех методик оценки активности ферментной системы, в свою очередь присутствует в двух вариантах техники проведения измерения.
- Можно измерить, сколько всего переработано субстрата за известный промежуток времени – измерения по конечной точке реакции (Методы А, В, E и F).
- Можно измерять, как быстро происходят изменения в реакционной смеси (помутнение или изменение окраски) – измерение кинетики (скорости) реакции (Методы C и В).
Качественный гель-тромб тест (Метод А) остался арбитражным анализом, в остальном все методы равнозначны, и испытание на бактериальные эндотоксины может быть проведено любым из перечисленных методов. В тоже время из всех приведенных в Фармакопее методов в практике контроля качества лекарственных средств практическое значение как контрольные анализы имеют три модификации:
Качественный гель-тромб тест (Метод А) - это самый простой в проведении анализ, он же является и арбитражным анализом.
Кинетический турбидиметрический тест (Метод С) и кинетический хромогенный тест (Метод D) - оба метода позволяют автоматизировать процедуру анализа, возможна одновременная проверка большого количества образцов.
Остальные методы используются или по инерции, как хромогенный тест по конечной точке, или в качестве исследовательских анализов – количественный гель-тромб тест.
