Телефон: +7 (495) 517-40-37

Кинетический хромогенный тест (Метод D)

               

ЛАЛ-реактив для кинетического хромогенного анализа содержит белки-ферменты вместе с искусственным хромогенным субстратом. Активированные эндотоксинами ферменты расщепляют искусственный субстрат, высвобождая входящий в его состав хромофор, и в растворе развивается желтое окрашивание. Интенсивность окрашивания пропорциональна активности свертывающего фермента. Чем выше концентрация эндотоксина, тем быстрее идет реакция, и тем меньше надо времени, чтобы оптическая плотность достигла предопределенного порогового значения. Оптическая плотность реакционной смеси измеряется при длине волны 405 нм. Основное достоинство метода в том, что можно проводить измерения одновременно с инкубированием, нет необходимости в остановке реакции.  

Анализ практически всегда проводится на микропланшетных фотометрах, и для обработки результатов необходимо программное обеспечение. Этот метод характеризуется широким диапазоном измеряемых концентраций – калибровочную кривую можно построить в диапазоне от 0,005 ЕЭ/мл до 50 ЕЭ/мл. Чувствительность метода также очень высокая, вплоть до 0,001 ЕЭ/мл. Использование приборов и программ позволяет автоматизировать процедуру проведения анализа и обработку результатов.  

В 90х годах этот метод стал очень популярен и использовался многими крупными производителями. Так, например, Novo Nordics стала проверять им свои инсулины, авторитет компании сформировал что-то вроде стандарта на инсулин – если инсулин, то проверять надо обязательно кинетическим хромогенным методом. Этот метод и сегодня является одним из наиболее используемых в контроле анализов.  

Для проведения кинетического хромогенного анализа предназначен ЛАЛ-реактив Endosafe Endochrome-K. Он поставляется во флаконах по 3,2 мл по 10 и 100 флаконов в упаковке или в виде готового набора, рассчитанного на проведение 256 определений. В набор входит 8 флаконов ЛАЛ-реактива, 2 флакона контрольного стандарта эндотоксина и 3 флакона воды для ЛАЛ-теста по 30 мл во флаконе. Максимальная чувствительность реактива в данном методе составляет 0,005 ЕЭ/мл.