Телефон: +7 (495) 517-40-37
Корзина0 товаров
на сумму 0 руб.

Гель-тромб тест (Методы А и B)

           

Гель-тромб тест — это наиболее простой и экономичный метод проведения анализа. Для его проведения смешивают равные количества ЛАЛ-реактива и испытуемого препарата, эти реакционные смеси инкубируют 60 мин при температуре 37°С. Если в результате реакции получается твердый гель – результат называется положительным и означает, что концентрация эндотоксина равна или более чувствительности ЛАЛ-реактива. Если гель не образуется – результат отрицательный, и это означает, что концентрация эндотоксина менее чувствительности ЛАЛ-реактива.



Положительный результат (+)

 

Отрицательный результат (-)

 Достоинствами этого анализа являются простота проведения, минимум необходимого оборудования, хорошая воспроизводимость результатов.  

Впервые этот анализ был описан в Фармакопее США в 1980 году (USP XX). В этой редакции еще не было деления на качественную и количественную модификации метода. Концентрация эндотоксина определялась путем последовательного разведения испытуемого образца водой. При этом исходная концентрация эндотоксина в препарате постепенно снижается и, наконец, становится меньше чувствительности ЛАЛ-реактива. Точка перехода в этом частном случае называется «конечной точкой» реакции, и по ней рассчитывается содержание эндотоксина в испытуемом образце. В настоящее время такой способ проведения анализа называется Количественным гель-тромб тестом (Метод В). Таким образом можно определить концентрацию эндотоксина в испытуемом образце, однако для того, чтобы найти точку перехода, необходимо ставить множественные разведения испытуемого препарата. Собственно, необходимость проверки большого количества разведений испытуемого препарата и, соответственно, большой расход ЛАЛ-реактива, и является главным ограничением этого метода.

В конце 80х годов в Европейскую Фармакопею была включена сильно усеченная редакция Количественного анализа, которую впоследствии назвали Качественным гель-тромб тестом (Метод А). В опыт ставится минимум проб – одно разведение для образца и положительный контроль этого разведения, контроли опыта также сведены к двум точкам – положительный контроль 2λ и отрицательный контроль. Естественно, этот вариант стал наиболее популярен, поскольку в нем использовалось наименьшее количество реактивов, да и подготовка занимала значительно меньше времени. Фактически качественный анализ вытеснил количественный тест из области контрольных (официальных фармакопейных) анализов в область предварительных исследований и внутрипроизводственного контроля.  

Для гель-тромб теста (Методы А и В) выпускается большой ряд ЛАЛ-реактивов Endosafe. Они выпускаются в стандартной фасовке по 5,2 мл во флаконе, также есть флаконы по 1,2 мл реактива во флаконе и пробирки на одно определение, которые следует сразу разводить 0,2 мл испытуемого препарата. Реактивы имеют различный диапазон чувствительности от 0,25 ЕЭ/мл до 0,015 ЕЭ/мл. Есть также универсальный ЛАЛ-реактив Endosafe KTA, который может одновременно использоваться для проведения гель-тромб теста и кинетического турбидиметрического теста (Метод С).