Телефон: +7 (495) 517-40-37

Кинетический турбидиметрический тест (Метод С)

               

Кинетический турбидиметрический тест можно считать прямым продолжением классического гель-тромб теста. В этом анализе измеряется не образование геля, а степень помутнения реакционной смеси, которая предшествует этому образованию. Турбидиметрический тест появился сразу в редакции кинетического анализа – измеряется скорость реакции, и по ней судят о концентрации эндотоксина. Чем выше концентрация эндотоксина, тем быстрее идет реакция, соответственно, меньше времени требуется для достижения заданного значения порога оптической плотности.

Правда, первоначальная реализация этой идеи оказалась не очень удачной. Во-первых, для того чтобы отодвинуть подальше момент образования геля, было выбрано нестандартное отношение объемов в реакционной смеси - 4 объема испытуемого препарата и 1 объем ЛАЛ-реактива. Общий объем 500 мкл помещался только в пробирки, и анализ проводили в специальных пробирочных ридерах. Фактически ЛАЛ-реактив сильно разводился препаратом, и в этом общем объеме гель уже не образовывался. Но в этой редакции проведения анализа серьезной проблемой стало ингибирование реакции со стороны препарата. А так как препарата в растворе оказалось значительно больше, чем в обычном соотношении, то и ингибирование стало проявляться в большей степени. Второй проблемой была невысокая сходимость результатов опытов, полученных с разными сериями ЛАЛ-реактива. Тут причина понятна – еще не умели достаточно точно стандартизировать количество в реактиве естественного субстрата – коагулогена.

В середине 90х проблемы стандартизации ЛАЛ-реактива для турбидиметрического анализа были решены, и современная редакция анализа предполагает проведение анализа в стандартных объемах 100 мкл + 100 мкл на планшетах (хотя некоторые производители реактива допускают и пробирочные варианты опыта). Результаты анализа хорошо воспроизводимы, а реактив по своим свойствам - правила хранения, стабильность после разведения, буферная емкость - не отличается от привычного реактива для гель-тромб теста. Есть даже универсальные реактивы, которые могут быть использованы в обоих анализах. На сегодняшний день кинетический турбидиметрический анализ, пожалуй, наиболее используемый инструментальный анализ.

Измеряемый диапазон концентрации для кинетического турбидиметрического метода определяется калибровочной кривой и может быть очень широк - от 0,005 ЕЭ/мл до 50 ЕЭ/мл. Функции измерения выполняет прибор, например, фотометр для микропланшет, полученные данные обрабатываются специальными компьютерными программами. К достоинствам метода можно отнести очень широкий диапазон измерений и высокую чувствительность. Программное обеспечение позволяет автоматизировать процедуру оценки и интерпретации результатов, программа автоматически генерирует протоколы анализа. Все полученные данные хранятся в виде архива.

 

Для проведения кинетического турбидиметрического анализа предназначены реактивы Endosafe KTA и Endosafe KTA2. Реактив Endosafe KTA позволяет определять содержание эндотоксинов в диапазоне от 0,05 до 50 ЕЭ/мл. Этот реактив также подходит и для проведения гель-тромб теста. Реактив Endosafe KTA2 позволяет определять содержание эндотоксинов в диапазоне от 0,005 до 50 ЕЭ/мл.  

Реактивы поставляются в упаковках по 6, 12 и 100 флаконов, по 5,2 мл во флаконе.