Будни испытательной лаборатории. К вопросу о вариантах проведения внутрилабораторного контроля.
09.02.2023Демидова В.В. Руководитель испытательной лаборатории НПО «ЛАЛ-Центр»
Этой статьей мы начинаем цикл статей, посвященной трудовым будням испытательной лаборатории. Мы надеемся, что наши наблюдения и советы будут полезны нашим читателям. Во всяком случае мы собираемся писать о том, что нас действительно беспокоит и о том, с чем мы сталкиваемся в своей практике.
Неотъемлемой частью работы испытательной лаборатории является мониторинг достоверности результатов своей деятельности. Обычно программы внутрилабораторного контроля (ВЛК) включают модельные опыты, в которых проверяются знания и умения сотрудников, понимание ими требований нормативной документации и умение работать с оборудованием испытательной лаборатории.
Такие тестовые задачи на знание теории и практики эксперимента проводятся ежегодно. Обычно они представляют собой модельные задачи, в которых можно проверить правильность соблюдения правил нормативной документации. В части ЛАЛ-теста это в первую очередь работы по проведению анализа «Подтверждение заявленной чувствительности ЛАЛ-реактива» и «Проверка достоверности критериев калибровочной кривой». На таких опытах хорошо проверять умения и навыки сотрудников по получению ожидаемого результата. Однако модельные задачи при всей их привлекательности в качестве тест-задач для ВЛК не вполне отвечают следующей установке ГОСТ ISO/IEC 17025-2019, в которой в частности говорится:
Полученные данные должны регистрироваться таким образом, чтобы можно было выявить тенденции, и там, где это практически возможно, должны применяться статистические методы для анализа результатов (ГОСТ ISO/IEC 17025:2019. /7.7 Обеспечение достоверности результатов/7.7.1 (выдержка))
Если говорить о ЛАЛ-тесте и определении эндотоксинов, то для решения задачи сопоставления результатов необходимо проведение периодической проверки стандартного образца с известной, аттестованной концентрацией эндотоксина и сравнения полученных результатов таких проверок, как по времени, так и по сотрудникам, проводящим анализ. Сама по себе возможность статистической обработки результатов внутрилабораторного контроля открывает очень интересные возможности и оценки правильности работы лаборатории.
Для решения такой задачи нужно подготовить и аттестовать стандартный образец с известной концентрацией эндотоксина, который затем можно было бы использовать в течение длительного времени для проведения тестовых анализов и накопления статистики. Задача подготовки и аттестации стандартного образца сложна, и она не по плечу большинству лабораторий.
Мы решили не готовить образец, а принять в качестве стандартного образца готовый препарат КСЭ (строго говоря, оставшиеся без серии ЛАЛ-реактива несколько десятков флаконов КСЭ). В нашем случае такой препарат не рассматривался как Контрольный стандарт эндотоксина, мы рассматривали его как стандартизованный лиофилизированный препарат липополисахарида E.coli 055:В5 с содержанием 10 нг во флаконе. Срок годности, установленный производителем – четыре года, это гарантия стабильности характеристик препарата, который будет использован в программе ВЛК, рассчитанной на период год или более. Срок использования разведенного флакона составляет 28 суток, это позволяет провести несколько анализов с использованием этого флакона в течение месяца. Проверка концентрации будет проводиться инструментальными методами, в условиях постоянно работающей лаборатории это задача совершенно необременительная, потому что такой испытуемый образец легко встраивается в любой количественный анализ. Работа с такими стандартными и стабильными образцами в течение года и более дает возможность собрать большой статистический материал количественных результатов, полученных однотипными методами.
Мы назвали программу работы с этими образцами «Оценка правильности, точности и прецизионности количественного определения бактериальных эндотоксинов» и эта программа была апробирована нами в 2021 и 2022 годах. Суть программы – измерение активности препарата эндотоксина (ЛПС). Во флаконе содержится 10 нг очищенного липополисахарида E.coli 055:B5. Флакон разводится 5 мл воды для ЛАЛ-теста и проводится количественная оценка концентрации эндотоксинов в полученном растворе. Согласно инструкции производителя раствор может храниться в течение 28 суток, т.о. он может быть использован неоднократно в течение месяца для постановки опыта разными сотрудниками. Далее вскрывается и проверяется следующий флакон и т.д. Так, без особых сложностей и затрат можно проводить любую серию измерений. Анализ количественный, такой образец может быть добавлен в любой опыт без особых проблем.
Получается, что без специальных затрат можно получить достаточно большой массив результатов, статистическая обработка которых может быть очень полезна для отчётности Испытательной лаборатории. Опыты проводят все сотрудники ИЛ, результаты, полученные в течение года, обрабатываются и включаются в отчет по ВЛК.
Ниже приводятся фрагменты программы, которая выполнялась в 2021 и 2022 годах и в которой были задействованы два сотрудника испытательной лаборатории.
1.Результаты 2021 года
1.1.Первичная оценка результатов измерений.
Всего обоими сотрудниками ИЛ было проведено 13 измерений, среднее значение активности проверяемого препарата эндотоксина составило 28,5564 ЕЭ/нг. Учитывая допустимую ошибку опыта 50-200%, приемлемый коридор результатов помещается в диапазон 14,2781 ЕЭ/нг – 57,1128 ЕЭ/нг.
Результаты измерений, сделанные сотрудниками в 2021 году, приведены на рисунках 1 и 2.
Рис. 1. Результаты измерений, сделанных сотрудником №1. Всего 4 измерения, все результаты поместились в коридор допустимых значений.
|
Рис. 2. Результаты измерений, сделанных сотрудником №2. Всего сделано 9 измерений, все результаты поместились в коридор допустимых значений.
|
Пояснения к рисункам.
* Синей чертой обозначено среднее значение активности препарата эндотоксина, равное 28,5564 ЕЭ/нг, пунктирными синими линиями обозначены границы коридора приемлемых значений (50-200%) составляющие 14,2782 ЕЭ/нг и 57,1128 ЕЭ/нг.
** Измерения, сделанные сотрудником, обозначены в виде отрезка с усами, обозначающими разброс равный 50-200% от полученной величины.
Все измерения, сделанные каждым из сотрудников, поместились в коридор допустимых значений. Отклонений не выявлено.
1.2.Оценка правильности и прецизионности результатов.
Результаты измерений 2021 года по сотрудникам приведены в таблице №1:
Измерение |
Сотрудник 1, результат, ЕЭ/нг |
Сотрудник 2, результат, ЕЭ/нг |
1 |
39,1738 |
27,1147 |
2 |
26,6908 |
26,1437 |
3 |
24,9724 |
42,4996 |
4 |
29,7743 |
20,8577 |
5 |
|
29,8757 |
6 |
|
39,1738 |
7 |
|
16,0787 |
8 |
|
27,3534 |
9 |
|
21,5244 |
*Правильность, % |
105,6% |
97,5% |
**CV,% |
22,2% |
29,8% |
Пояснения к таблице №1.
* Правильность или точность определения концентрации БЭ сотрудником рассчитывалось как относительное среднее значение результатов, полученных сотрудником к общему среднему значению активности препарата эндотоксина, определенному по результатам всех измерений.
** Коэффициент вариации, CV рассчитывался как относительное значение рассеяния результатов, полученных сотрудником (СКО) по отношению к среднему результату всех измерений.
Для обоих сотрудников показан сопоставимый уровень результатов правильности и прецизионности.
2.Результаты 2022 г.
2.1.Первичная оценка результатов измерений.
Всего обоими сотрудниками ИЛ было проведено 12 измерений, среднее значение активности проверяемого препарата эндотоксина составило 14,2332 ЕЭ/нг. Учитывая допустимую ошибку опыта 50-200%, приемлемый коридор результатов помещается в диапазон 7,1166 ЕЭ/нг –28,4664 ЕЭ/нг. Надо отметить, что в 2021 и 2022 годах использовались разные серии препаратов эндотоксина, поэтому средние значения активности по годам так сильно различаются.
Результаты измерений, сделанные сотрудниками в 2022 году, приведены на рисунках 3 и 4.
Рис. 3. Результаты измерений, сделанных сотрудником №1. Всего выполнено 6 измерений, все результаты поместились в коридор допустимых значений.
|
Рис. 4. Результаты измерений, сделанных сотрудником №2. Всего сделано 6 измерений, все результаты поместились в коридор допустимых значений.
|
Так же как и в прошлом году, все результаты, полученные обоими сотрудниками, уместились в коридор допустимых значений. Не было зарегистрировано ни одного неудовлетворительного результата, выходящего за пределы нормального распределения.
Все измерения, сделанные каждым из сотрудников, поместились в коридор допустимых значений. Отклонений не выявлено.
2.2.Оценка правильности и прецизионности результатов.
Результаты измерений 2022 года по сотрудникам приведены в таблице №2:
Измерение |
Сотрудник 1, Результат, ЕЭ/нг |
Сотрудник 2, Результат, ЕЭ/нг |
1 |
11,8158 |
10,9324 |
2 |
15,3766 |
13,3764 |
3 |
11,6120 |
10,9072 |
4 |
10,3236 |
11,7854 |
5 |
21,3586 |
18,7349 |
6 |
20,3422 |
14,2332 |
Правильность |
106,4% |
93,6% |
CV,% |
33,3% |
20,9% |
Для обоих сотрудников показан сопоставимый уровень результатов правильности и прецизионности.
3.Обобщение результатов по 2021 и 2022 годам.
Поскольку работы в разные годы выполняли с разными препаратами эндотоксина, сравнивать можно не полученные значения концентрации эндотоксина, а относительные величины. В наших примерах это значения правильности и прецизионности. В сводной таблице №3 приведены эти значения в динамике 2021-2022 гг:
Критерии |
Год |
Сотрудник 1 |
Сотрудник 2 |
Правильность |
2021 |
105,6% |
97,5% |
2022 |
106,4% |
93,6% |
|
Прецизионность |
2021 |
22,2% |
29,8% |
2022 |
33,3% |
20,9% |
Сравнивая результаты, полученные для разных сотрудников, можно отметить, что они очень мало отличаются, что, впрочем, неудивительно, поскольку все сотрудники ИЛ имеют большой и примерно одинаковый опыт работы с методом.
Заключение.
В целом, оценку поставленному эксперименту можно поставить удовлетворительную. Модель проверки получилась приемлемой и доступной. На год достаточно 10-12 флаконов препарата эндотоксина одной серии. Измерение концентрации легко встраивается в любой текущий количественный анализ.
Очевидно, что для хорошей статистики желательно было бы набрать хотя бы 20-30 измерений за год. Соответственно большая статистика требуется и по индивидуальным результатам для сотрудников. Конечно, неплохо было бы, если и количество задействованных сотрудников было бы больше двух, тогда интереснее сравнивать результаты разных по уровню подготовки аналитиков. Впрочем, такие идеи явно уже уходят за рамки технических задач проведения ВЛК, с которых мы начинали наши рассуждения.
Каждая лаборатория может самостоятельно устанавливать правила проведения ВЛК в соответствии с условиями работы: количество сотрудников, пропускной способности лаборатории и т.д. Мы надеемся, что информация, рассмотренная нами в статье, и наш эксперимент будут приняты во внимание при организации Вашего ВЛК.