Телефон: +7 (495) 517-40-37

Хромогенный тест по конечной точке (Метод Е)

Этот вариант проведения анализа появился в начале 90х годов и сразу завоевал популярность у крупных предприятий-производителей. Для проведения этого анализа используется ЛАЛ-реактив с искусственным хромогенным субстратом. Этот субстрат состоит из полипептидной цепочки и хромофора р-нитроанилина (рНА). Аминокислотная последовательность полипептида аналогична аминокислотной последовательности коагулогена, предшествующей разрезаемой свертывающим ферментом связи. Поэтому активный свертывающий фермент «по ошибке» разрезает эту связь, высвобождая хромофор р-нитроанилин, в результате чего в растворе развивается желтое окрашивание.

Анализ проводят в две стадии. На первой стадии ЛАЛ-реактив инкубируют с испытуемым образцом и контролями для первоначальной активации ферментной системы. На втором этапе к активированным ферментам добавляют субстрат и после непродолжительного инкубирования реакцию останавливают добавлением кислоты. После этого измеряют значение оптической плотности по всем ячейкам. Инкубирование и измерение оптической плотности может быть проведено на разном оборудовании, и для проведения измерения необязательно использование сложных приборов, оснащенных модулем инкубирования.

Калибровочная кривая строится по трем-четырем концентрациям КСЭ. Чувствительность метода и измеряемый диапазон концентраций эндотоксинов зависят от времени первого и второго инкубирований. Диапазон измеряемой концентрации составляет всего один порядок, например, от 0,1 ЕЭ/мл до 1,0 ЕЭ/мл или от 0,5 ЕЭ/мл до 5,0 ЕЭ/мл.


К достоинствам метода можно отнести простую процедуру оценки результатов. Для расчета концентрации эндотоксина можно использовать калькулятор, электронные таблицы (MSExcel), а можно построить простую калибровочную кривую на миллиметровке. К недостаткам метода можно отнести достаточно сложную процедуру проведения реакции, которая складывается из нескольких этапов, жестко регламентированных по времени и связанных между собой, а также ограниченный диапазон измеряемых концентраций эндотоксина.

Хромогенный тест по конечной точке по своим возможностям сильно уступает хромогенному кинетическому методу, он используется до сих пор, хотя и очень ограничено, даже сегодня встречаются НД на импортные препараты, в которых прописано проведение ЛАЛ-теста этим методом
Для проведения хромогенного анализа по конечной точке предназначен набор Endpoint Chromogenic по конечной точке.

Для проведения хромогенного анализа по конечной точке предназначен набор Endpoint Chromogenic. Данный набор рассчитан на проведение 140 определений. В набор входит 5 флаконов ЛАЛ-реактива по 1,4 мл во флаконе, 2 флакона контрольного стандарта эндотоксина, 2 флакона воды для ЛАЛ-теста по 30 мл во флаконе, флакон хромогенного субстрата и флакон буферного раствора. Максимальная чувствительность реактива в данном методе составляет 0,015 ЕЭ/мл.   

фото-2.JPG